一棵蘑菇
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草菇菌種的提純複壯初探

發布日期:2020-03-03 作者: 點擊:

菌種的分離與篩選是在食用菌栽培過程中的重中之重。食用菌的菌種在使用過程中存在著變異與退化,尤其是草菇菌絲,生長快退化也快,因此要定期引種或提純複壯,一棵蘑菇才能保證菌種質量及種性穩定,從而為最終產量穩定打下基礎。

1組織分離

工廠化生產草菇時,一棵蘑菇為了保證種性穩定,大多采用定期組織分離、嚴格篩選,獲得菌種。一般每次選擇種菇時,首先要選擇出菇好(產量高,整體菇形大小適中,整齊度高)的菇房,菇房內無明顯病蟲害;其次在此菇房內選擇出菇的床架,從該床架中挑選出菇的料層;在該料層上的一片菇中選擇無雜菌蟲害、生長健壯、非常結實、底盤肥大的草菇幼菇(五六分熟,呈小水蜜桃狀)3~4個。采下幼菇立即放入無菌或潔淨的塑料袋中,連同分離用的試管培養基帶到菌種室超淨工作台。

組織分離時,先用75%的消毒酒精消毒雙手和工具以及種菇表麵(操作熟練者也可不消毒種菇表麵),用充分灼燒的手術刀先在縱麵上淺淺的環切一道(不要切破外菌幕),在種菇的基部從正中切開一個小口,用手捏種菇外部剝開菇蕾,在菇蓋與菇柄交界處用滅過菌冷卻後的手術刀淺切一個“田”字形,每個小塊3~4mm見方(盡量不要劃穿菇肉觸及菌褶),直接用刀將菌肉小塊接入試管培養基上,塞上棉塞。將菌肉小塊拍到試管底部,置於29~31℃環境培養。分離到的試管要達到24支左右,如因操作失誤而達不到此數量,要補充合格種菇再分離。

2分離菌株的鑒定與篩選

2.1初篩1

①一般分離培養3d左右菇肉上萌發出白色菌絲,此時挑出因操作不過關而導致斜麵感染雜菌的試管,餘下繼續培養;

②待菌絲長至2cm左右時,觀察菌絲生長情況:a基內菌絲整齊濃密,纖細有力呈銀灰色,生長速度快;氣生菌絲爬壁能力強,長勢整齊一致的繼續培養;b.基內菌絲很稀疏,氣生菌絲長勢混亂,氣生菌絲發白,氣生菌絲遠比基內苗絲多或者感染雜菌,隻要出現其中一種情況就剔除;

③觀察滿管快慢,標注滿管時間;

④觀察厚垣孢子出現早晚,標注時間;優先選擇先滿管先出現厚垣孢子的試管,留的12株,不足則有多少留多少。

2.2初篩2

①將剩餘的12株編號VZl~VZ12,取尖端菌絲轉管,底部3cm不動,每支轉20~30支,對應標注VZlMI~VZ12M1;

②轉管後剩餘的菌種,在酒精燈下,敲破試管底部(可用小砂輪沿底部無培養基處用力劃出痕跡,然後在火焰上稍稍烤一下,如未破裂,迅速用冷的酒精棉球冷卻可使試管底部破裂),用滅過菌的打孔器在底部1~2cm位置打孔取樣(打孔器直徑4~5mm),打2排孔,每排2個;靠基部的那排接到平板中央,另一排接到平板邊沿;菌絲麵貼培養基,標注與轉管試管相同,置於29~31℃倒置培養;

③轉管試管的篩選方式與下述“草菇母種轉管篩選”相同;平板分2塊:接在中央的菌種,主要對比菌絲形態,色澤、均一度,是否存在角變,淘汰不穩定的菌株;接在邊沿的菌株,主要比較每組的平均生長速度,如果平板的蓋板無冷凝水的,比較其爬壁力;綜合評比後,篩選出最佳的8株。

2.3複篩

①待厚垣孢子出現後,將篩選出的8個菌株的試管置於20℃下避光保藏;

②8株菌株挑的1~2個平板接原種,離接種塊2cm處打孔取樣,每個樣接1袋原種,菌絲麵貼料麵。每個菌株接30袋,29~31℃避光培養,記錄其生長速度、觀測菌絲色澤及長勢(原種培養基須按配方精確稱量,嚴格控製料水比,拌料均勻,裝袋重量、高度、鬆緊度一致)。

③篩選出表現最佳的4個菌株,每個菌株挑的20袋原種,5袋置於20℃避光保藏,15袋進行出菇試驗。

3出菇試驗

出菇試驗對於所有食用菌的育種都是最關鍵的一步,通過出菇試驗比較不同菌株之間的優劣,篩選出不同菌株適合的生產模式。

草菇組織分離平板接原種的同時,外來引種經轉管篩選後的母種,每個菌株接30袋原種;當厚垣孢子都出現後,每個菌株挑出較好的15袋做出菇試驗。

①4個菌株加外來引種各15袋,每個菌株每組5袋,3個重複;

②沿底部折角割去袋底,袋口留2cm,多餘割去,排在菇床架上;

③噴出菇水:出菇水的溫度、pH值與正常出菇水相同,總水量約為原種幹重的30%,噴完出菇水後蓋無紡布進入催蕾環節;出菇水根據實際情況調節,做到底部不滴水,寧少勿多,防止因水分過多造成大幅度減產。

④催蕾及出菇管理與常規同,采收記重時記錄每組的采收時間和采收菇重,統計分析時每組剔除1袋最差的,其餘統計分析比較平均生物轉化率、開始出菇時間和清床時間;保留生物轉化率最高、周期最短的2個菌株;淘汰的菌株對應的保藏原種停止保藏,保留的2個菌株對應的保藏原種在有效期內輪流轉擴栽培種投人生產。

4草菇母種轉管篩選

轉管前要將種源在29~31℃的環境下培養24~48h,轉管時要做到空白斜麵無冷凝水,接種塊大小一致,規格3mm×3mm~4mm×4mm,菌種塊直接掉到底部,不要在培養基上劃過,29~31℃環境下避光培養。

①接種後24h,觀察萌動情況,正常12h萌動;

②接種後48h,觀察菌絲生長情況:a基內菌絲整齊濃密,纖細有力呈銀灰色,生長速度快;氣生菌絲爬壁能力強,長勢整齊一致的繼續培養;b基內菌絲很稀疏,氣生菌絲長勢混亂,氣生菌絲發白,氣生菌絲遠比基內菌絲多或者感染雜菌,出現其中一種情況要剔除;c相對a而言,生長速度略慢,標注後對比培養(有些種塊在接種時燙傷而萌動慢造成的,後期培養指標合格可以使用);

③接種後72h,觀察氣生菌絲的爬壁能力,將爬壁能力較弱的剔除;

④接種後84~120h,正常菌絲滿管,比較檢查時要將培養不同天數滿管的標注並分開(分成3類);培養144h未滿管的剔除;

⑤接種後156~240h,正常菌絲出現磚紅色厚垣孢子,每天檢查,出現厚垣孢子後,標注出現日期,當天放置到18~22℃環境避光保存(保藏時將不同天數滿管的分開放);培養240h未出現厚垣孢子的剔除。

注:斜麵母種在30d有效保藏期內使用的,對於同一批次同一品種的,優先使用菌絲先長滿的;在菌絲同一天長滿的裏麵優先使用先出現厚垣孢子的。

5原種和栽培種的篩選

生產原種和栽培種之前,在接種前48h,取出保藏菌種置於29~31℃下恢複培養。

原種的篩選標準:以生長速度、菌絲色澤和健壯程度、厚垣孢子出現早晚為基準;采用標準棉子殼配方29~31℃培養,一般48~72h封麵,8~10d長滿,12~15d出現厚垣孢子,10d內未長滿的淘汰;菌絲纖細有力呈銀灰色的保留,菌絲變濃白或局部變濃白的的淘汰;由於配方以及含水量的不同,上述參數會有所不同,根據實際情況選擇菌絲外觀好生長速度快的原種,出現厚垣孢子早的更好。

栽培種的篩選與原種基本相同,差異在時間上,一般使用標準配方在29~31℃培養,48h封麵,7~10d長滿,11~14d出現厚垣孢子,10d內未長滿的淘汰。

6菌種保藏期限

草菇母種出現厚垣孢子之後立即置於18~22℃環境避光保藏,30d內使用最佳,最長不超過60d,草菇原種出現厚垣孢子之後立即置於18~22℃環境避光保藏,20d內使用;草菇栽培種出現厚垣孢子之後立即使用,18~22℃下保藏前3天效果最佳,最多存放7d。


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